Análisis de artículo de prueba PCR en ECV

T: Detección de Chlamydia pneumoniae en tejido aórtico humano: amplificación del gen kdtA e hibridación in vitro.

O: Diagnóstico. Investigar la presencia de C. pneumoniae en muestras de tejido aórtico de catorce pacientes sometidos a cirugía de reemplazo aórtico, utilizando la amplificación del genkdtA por PCR acoplada a un ensayo de hibridación in vitro.

M: Tejido aórtico obtenido de catorce pacientes con diagnóstico de enfermedad de aorta ascendente en un frasco estéril que contenía una solución de etanol al 70%. (Las muestras fueron almacenadas a 4°C hasta el momento de la extracción de ADN).

AN: ADN bacteriano. La extracción de ADN a partir de tejido de aorta se estandarizó utilizando 4 muestras que fueron sometidas a procedimientos de extracción con dos estuches comerciales (QIAamp DNA Mini Kit de QIAGEN® y AquaPure Genomic DNA kit de BIORAD ®) de acuerdo con las recomendaciones de los fabricantes. El ADN de las 10 arterias restantes se extrajo utilizando el estuche AquaPure Genomic DNA de BIO-RAD®.

G: Gen kdtA.

PCR: PCR Estándar.

Se empleó el estuche/kit: Light Diagnostics^TM Chlamydia pneumoniae Oligodetect de Chemicon®, de acuerdo con las recomendaciones del fabricante.

Perfil térmico: 40 ciclos de denaturación, anillaje y elongación a 94°C (1 min), Denaturación inicial de 1 minuto a 94°C; 58°C (30 seg) y 72°C (1 min), respectivamente, y 8 minutos a 72°C para la elongación final.

V: Por electroforesis en geles de poliacrilamida al 6% en corrido de 150 minutos a 80 voltios.

Control Negativo de Amplificación: 1ml de agua ultrapura en lugar de ADN.

Control Positivo: Se utilizó el que provee el estuche: Diagnostics^TM Chlamydia pneumoniae Oligodetect de Chemicon®.

Se señala que la técnica es muy sensible y específica, pero no se dan valores analíticos.

“…la técnica es altamente específica para la detección de C. pneumoniae, ya que se ha reportado (19) que la secuencia de aminoácidos deducida de la secuenciación de nucleótidos del genkdtA de C. pneumoniae amplificado por PCR en nuestro estudio tiene 69% de similitud y 43% de identidad con la secuencia correspondiente en C. trachomatis y C. psittaci (las otras dos especies que afectan al ser humano), lo cual hace de esta secuencia un candidato muy apropiado para la detección de C. pneumoniae debido a que no es de esperarse que existan reacciones cruzadas con las otras dos especies mencionadas.”

Se evitó la presencia de falsos positivos y negativos pues se trabajo juntamente con una técnica de hibridación in vitro.

ARTÍCULO: Detección de Chlamydia pneumoniae en tejido aórtico humano.